Культура почек сосунков крыс

AdShrdl-мутанты содержат делецию и замену в районе сайта Xbal на 4 ед. карты, расположенной на правом конце Е1А. Они также делились на I и II группы. Обе группы были дефектны в трансформации клеток эмбриона крыс, но так же, как I группа, AdSlir более эффективно трансформировали первичные культуры почек сосунков крыс.

Два других типа Adhr-мутантов были хладочувствительными (Babiss е. а., 1983). Первый из них не мог трансформировать первичные культуры фибробластов эмбриона крыс при 32°С. Нуклеотидный анализ ДНК выявил, что горячей точкой таких мутаций является последовательность glu-f-his — progen-his, локализованная в 46-аминокислотном сегменте 1,0 т. п. и. El А. Второй тип hics) хорошо размножался в клетках HeLa при 38°С, но плохо при 32,5 °С, в то время как в клеточной линии 293 размножался одинаково хорошо при обеих температурах инкубирования. При этом hrcs -мутанты, картируемые в El А, чувствительны к холоду как по индукции трансформации, так и экспрессии трансформированного фенотипа, а картируемые в Е1В дефекты в трансформации как при высокой, так и при низкой температуре. Эти данные показывают, что функции региона Е1А и Е1В требуются для инициации трансформации и экспрессии трансформированного фенотипа.

Однако расшифровка генетической природы ДИ-частиц полностью опровергла это мнение. ДИ-частицы, по существу, оказались летальными мутантами, возникшими в результате больших или малых делеции разных участков генома. При этом у ДИ-частиц могут быть утрачены один или несколько генов, что влечет за собой летальный эффект, т. е. неспособность их к самостоятельной репродукции. ДИ-частицы размножаются лишь в присутствии вируса-помощника, образуя с ним фенотипическую смесь, поэтому многие летальные мутации можно не только выделять, но и коллекционировать и даже идентифицировать. Тем не менее хорошие коллекции имеют далеко не все вирусы, что вызвано техническими трудностями работы с большими делециопнымн мутантами, которые все-таки детальны.