Хеддльсон (1929), изучая условия выращивания бруцелл, показал, что увеличение углекислоты скорее, чем уменьшение кислорода, влияет на стимуляцию роста Br. abortus. Оптимальное содержание углекислоты должно быть в среднем 10%. Хеддльсон высказал предположение, что углекислый газ необходим для поддержания определенного рН в среде. Наличие углекислоты задерживает образование в среде сульфатов и фосфатов натрия, кальция и прочих соединений, которые препятствуют росту бруцелл этого типа.
При последующих пересевах культур Br. abortus потребность их в повышенном содержании углекислоты исчезает и они становятся способными расти в обычной атмосфере.
Таким образом, определение отношения первых генераций выделяемой культуры бруцелл к атмосферному режиму дает возможность дифференциации бруцелл типа abortus от двух других типов.
Этот метод считается исторически первым методом дифференциации культур бруцелл.
Дифференциация типов бруцелл по образованию сероводорода. Как уже говорилось, культуры бруцелл при росте на питательных средах в процессе метаболизма выделяют сероводород, причем интенсивность выделения его у разных типов бруцелл выражена неодинаково.
Наиболее интенсивная и продолжительная (3-4 дня) продукция сероводорода наблюдается у штаммов бруцелл типа suis, несколько меньшая — на протяжении 2 дней — у штаммов бруцелл типа abortus. Культуры Вг. melitensis не проявляют способности к выделению сероводорода или проявляют ее в минимальных размерах.
Данный метод дифференциации бруцелл был обстоятельно изучен Цобелем и Майером. Авторы выяснили, что количество выделяемого культурами бруцелл сероводорода зависит от состава питательной среды и ее окислительно-восстановительного потенциала. Добавление к среде веществ, содержащих серу в легко редуцируемом состоянии (цистин, цистеин, тиогликолевая кислота, тиомочевина), способствует выделению свободного сероводорода.