Методика определения сероводорода состоит в следующем: на косой печеночный агар (рН=6,8-7,0) производят равномерный посев одной стандартной петли (диаметр 2 мм) 48-часовой одномиллиардной взвеси испытуемых и эталонных штаммов бруцелл.
Реактивом на сероводород служит насыщенный водный раствор уксуснокислого свинца, которым пропитываются, а затем высушиваются на воздухе полоски фильтровальной бумаги размером примерно 1X8 см. Свинцовые бумажки готовят впрок и хранят в закрытой банке из темного стекла.
Бумажку укрепляют между ватной пробкой и стенкой пробирки так, чтобы нижний конец ее находился над верхним краем агара с противоположной стороны его и не касался бы среды. Ватная пробка должна быть рыхлой, не задерживающей выхода из пробирки углекислоты, так как в плот1 но закрытых пробками пробирках накапливается углекислота, что задерживает образование сероводорода. Засеянные пробирки устанавливают в термостат при температуре 37°. Хороший рост бруцелл обычно наступает через 2 суток.
Показателем образования сероводорода служит потемнение нижнего конца бумажки, свисающего над посевом. Для количественного учета интенсивности образования сероводорода измеряют потемневшую часть бумажки (измерение производят в миллиметрах). Результаты учитывают 3 раза через каждые 2 дня. При каждом учете потемневшую свинцовую бумажку заменяют новой.
Для окончательной оценки способности штамма к образованию сероводорода показатели троекратного учета в течение 6 дней суммируются. Необходимо иметь в виду, что результаты этого опыта во многом зависят от состава питательной среды и количества засеваемого материала. Рекомендуется применять массивную дозу засева культуры, а в качестве питательных сред употреблять печеночный или картофельный агар, а также и среду «Д».