Каждое разведение антигена испытывают со всеми пятью разведениями сыворотки при одинаковой дозировке ингредиентов, равной 0,5 мл. Пробирки выдерживают в термостате при 37° в течение 24 часов, после чего производят учет реакции по стандарту мутности на темном фоне (см. ниже).
При учете реакции определяют разведение антигена, которое с конечным разведением стандартной национальной сыворотки 1 : 500 дает 50% агглютинации ( + + или 50% просветления надосадочной жидкости). Затем количество антигена уточняется: например, если сыворотка в конечном разведении 1 : 500 показала 50% агглютинации с разведением антигена 1 : 24, то для уточнения реакцию повторяют с разведениями 1 : 23, 1 : 24 и 1 : 25. После этого в соответствии с результатами титрования весь антиген разводится карболизированным физиологическим раствором.
Для удобства хранения и транспортировки стандартный антиген приготавливается в 10 раз большей концентрации и при использовании разводится в 10 раз 0,5% карболовым физиологическим раствором.
Реакция агглютинации объемным методом ставится по обычной методике.
Однако в соответствии с решением комитета экспертов биологической стандартизации Всемирной Организации Здравоохранения оценку степени просветления и, следовательно, степени агглютинации рекомендуется производить по стандартам мутности, которые приготовляются следующим образом: в 4 одинаковые по размеру с применяемыми для реакции агглютинации пробирки последовательно наливают 1-3 1; 2; 3 и 4 мл антигена, разведенного до 1 млрд. микробных клеток в 1 мл. Затем в том же порядке в 3 первые пробирки добавляется 3; 2; 1 мл карболизированного физиологического раствора, а в последнюю пробирку физиологический раствор не добавляется.